細(xì)胞培養(yǎng)是一種常用的發(fā)酵工藝,多采用攪拌式細(xì)胞發(fā)酵系統(tǒng),也可采用管式系統(tǒng)。在發(fā)酵過(guò)程中,不斷向發(fā)酵罐灌流培養(yǎng)液,同時(shí)以相同流量流出。灌流工藝的優(yōu)點(diǎn)是可在發(fā)酵過(guò)程中不斷去除細(xì)胞碎片和副產(chǎn)物,降低細(xì)胞死亡后釋放的各種酶類(lèi)可能對(duì)產(chǎn)物的影響。同時(shí),由于連續(xù)不斷的灌流新鮮培養(yǎng)液而提供一個(gè)較恒定的培養(yǎng)環(huán)境,因此可獲得較高的單位體積產(chǎn)率。由于灌流系統(tǒng)多采用細(xì)胞截留與回收系統(tǒng),因而可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高密度發(fā)酵。
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)各種添加物的具體作用:
胰島素(Insulin,貨號(hào):CSP001)作用廣泛,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對(duì)細(xì)胞的作用,進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類(lèi):代謝作用、促生長(zhǎng)作用、以及代謝和促生長(zhǎng)混合作用。胰島素對(duì)細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)其與細(xì)胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導(dǎo),而胰島素對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用則是通過(guò)其與細(xì)胞膜上胰島素樣生長(zhǎng)因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導(dǎo)的。在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來(lái)維持細(xì)胞生長(zhǎng),調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時(shí)抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。
丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate,貨號(hào):CSP003)是常見(jiàn)的丙酮酸鹽,是一類(lèi)內(nèi)源性小分子物質(zhì),丙酮酸鈉和丙酮酸均是天然存在于人體內(nèi),并參與全身各組織和器官的代謝。丙酮酸鈉在醫(yī)學(xué)上、診斷試劑以及醫(yī)療器械中被廣泛用作緩沖劑、賦形劑和抗氧化劑。在人體中行動(dòng)中大多數(shù)細(xì)胞只利用葡萄糖作為能量的物質(zhì)就夠了,而在細(xì)胞培養(yǎng)中丙酮酸鈉是必須的物質(zhì)。丙酮酸鈉在培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用,參與細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝。Hep G2,Caov-3及細(xì)胞培養(yǎng)基中就需要額外添加丙酮酸鈉,以維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。